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無菌取樣的關(guān)鍵
無菌取樣的關(guān)鍵
抽樣操作是整個(gè)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)流程的第一步,也是首先應(yīng)當(dāng)保證的重要環(huán)節(jié)。經(jīng)常會(huì)有這樣的情況:樣品檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)異常,我們排查了檢測(cè)流程的方方面面都沒有出現(xiàn)偏差,結(jié)果是樣品在抽樣時(shí)已經(jīng)被污染。這樣的情況事實(shí)上并不鮮見,如何杜絕呢?還得從規(guī)范抽樣操作開始。由于不同類型的樣品應(yīng)采取不同的抽樣操作,下面針對(duì)不同樣品的抽樣操作進(jìn)行分類闡述。??液體樣品:一般情況下,液體樣品比較容易獲得代表性樣品。液態(tài)食品一般盛放在大罐中,取樣時(shí)可連續(xù)或間歇攪拌。對(duì)于較小的容器,可在取樣前將液體上下顛倒,使其完全混勻。取得的樣品應(yīng)放在已滅菌的容器中送往實(shí)驗(yàn)室,實(shí)驗(yàn)室在取樣檢測(cè)之前應(yīng)當(dāng)把液體再徹底混勻一次。??固體樣品:根據(jù)所取樣品材料的不同,所使用的的工具也不同。固態(tài)樣品常用的取樣工具有解剖刀、勺子、軟木鉆、鋸、鉗子等,使用前均須滅菌。例如面粉或奶粉等已經(jīng)混勻的食品,其成分質(zhì)量均勻穩(wěn)定,可以抽取少量樣品檢測(cè)。但散裝樣品就必須從多個(gè)點(diǎn)取樣,且每個(gè)點(diǎn)都要單獨(dú)處理,在檢測(cè)前要徹底混勻。肉類、魚類或類似食品既要在表皮取樣,又要在深層取樣,深層取樣時(shí)要小心不要被表面污染。有些食品,如新鮮肉類或熟肉可用滅菌的解剖刀和鉗子取樣;冷凍食品在不解凍的狀態(tài)下用鋸、木鉆或電鉆,一般斜角鉆入來獲得深層樣品;粉末狀樣品取樣時(shí),可用滅菌的取樣器斜角插入箱底,樣品填滿取樣器后提出箱外,再用滅菌勺從取樣器的上、中、下部位采樣。??水樣:取水樣時(shí),最好選用帶有防塵磨口瓶塞的廣口瓶。對(duì)于氯氣處理過的水,取樣后在100mL水樣中加入0.1mL的2%的硫代硫酸鈉溶液。取樣時(shí)應(yīng)特別注意防止樣品的污染,樣品應(yīng)完全地充滿取樣瓶。如果樣品時(shí)從水龍頭上取得,龍頭嘴的里外都應(yīng)擦干凈。打開水龍頭讓水流幾分鐘,關(guān)上水龍頭并用酒精燈灼燒,再次打開水龍頭讓水流1-2min后再接樣并裝滿取樣瓶。這樣的取樣方法能確保供供水系統(tǒng)的細(xì)菌學(xué)分析的質(zhì)量,但如果檢測(cè)的目的是用于追蹤微生物的污染源建議還應(yīng)在水龍頭滅菌前取樣會(huì)在龍頭的里外用棉拭子涂抹取樣,以檢測(cè)水龍頭自身污染的可能性。從水庫、池塘、井水、河流等取水樣時(shí),用無菌的器械或工具拿取瓶子和打開瓶塞,在流動(dòng)水中取樣品是瓶嘴應(yīng)直接對(duì)著水流。大多數(shù)國家的官方取樣程序中已明確規(guī)定了取樣所用器械,如果不具備適當(dāng)?shù)娜觾x器或臨時(shí)取樣工具,只能用手操作,但取樣時(shí),應(yīng)特別小心,防止用手接觸水樣或取樣瓶內(nèi)部。??帶包裝食品:直接食用的小包裝食品盡可能取原包裝,直到檢測(cè)前不要開封防止污染;桶裝或者大容器包裝的液體或固體食品應(yīng)用無菌取樣器由幾個(gè)不同部位采取,一起放入一個(gè)滅菌容器內(nèi),不要過度潮濕,以防食品中固有的細(xì)菌繁殖;對(duì)于桶裝或大容量包裝的冷凍食品,應(yīng)從幾個(gè)不同的部位用滅菌工具抽樣,使之有充分的代表性,將樣品送達(dá)實(shí)驗(yàn)室前,要始終保持樣品處于冷凍狀態(tài)。若樣品一旦融化,不可使其再冷凍,保持冷卻即可。??表面采樣:通過惰性載體可以將表面樣品上的微生物轉(zhuǎn)移到合適的培養(yǎng)基中進(jìn)行微生物檢測(cè),這陣惰性載體既不能引起微生物的死亡,也不應(yīng)使其增殖。這樣的載體包括清水、拭子等。要達(dá)到微生物既不死亡又不增殖很困難,因此取樣后應(yīng)當(dāng)盡快進(jìn)行檢測(cè)。表面取樣技術(shù)只能直接轉(zhuǎn)移菌體,不能做系列稀釋,只有在菌體數(shù)量較少的時(shí)候適用,其最大的優(yōu)點(diǎn)是取樣過程不破壞樣品。常用的表面取樣技術(shù)包括棉拭子、淋洗法、膠帶法等,這里以棉拭子法為例。定性檢測(cè)時(shí),只要涂抹全部需要檢測(cè)的表面即可。而進(jìn)行的定量檢測(cè)時(shí),必須先用滅菌取樣框確定被測(cè)試的區(qū)域。用干燥的棉花纏在4cm長,直徑1-1.5mm的木棒或不銹鋼棒上做成棉拭子(為了方便也可使用一次性棉簽),放進(jìn)合金試管中,蓋上蓋子后滅菌。取樣時(shí)先將拭子在稀釋液中浸濕,然后再待測(cè)樣品表面緩慢旋轉(zhuǎn)拭子平行用力涂抹兩次。涂抹過程中應(yīng)保證拭子在取樣框內(nèi)。取樣后拭子重新裝回有10mL取樣溶液的試管中。??以上就是各種情況下無菌抽樣的操作要求。無菌抽樣的規(guī)范性是保證樣品檢測(cè)準(zhǔn)確性的前提,因此我們?cè)谌訒r(shí)應(yīng)規(guī)范操作,確保從源頭杜絕污染。
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抽樣操作是整個(gè)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)流程的第一步,也是首先應(yīng)當(dāng)保證的重要環(huán)節(jié)。經(jīng)常會(huì)有這樣的情況:樣品檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)異常,我們排查了檢測(cè)流程的方方面面都沒有出現(xiàn)偏差,結(jié)果是樣品在抽樣時(shí)已經(jīng)被污染。這樣的情況事實(shí)上并不鮮見,如何杜絕呢?還得從規(guī)范抽樣操作開始。由于不同類型的樣品應(yīng)采取不同的抽樣操作,下面針對(duì)不同樣品的抽樣操作進(jìn)行分類闡述。??液體樣品:一般情況下,液體樣品比較容易獲得代表性樣品。液態(tài)食品一般盛放在大罐中,取樣時(shí)可連續(xù)或間歇攪拌。對(duì)于較小的容器,可在取樣前將液體上下顛倒,使其完全混勻。取得的樣品應(yīng)放在已滅菌的容器中送往實(shí)驗(yàn)室,實(shí)驗(yàn)室在取樣檢測(cè)之前應(yīng)當(dāng)把液體再徹底混勻一次。??固體樣品:根據(jù)所取樣品材料的不同,所使用的的工具也不同。固態(tài)樣品常用的取樣工具有解剖刀、勺子、軟木鉆、鋸、鉗子等,使用前均須滅菌。例如面粉或奶粉等已經(jīng)混勻的食品,其成分質(zhì)量均勻穩(wěn)定,可以抽取少量樣品檢測(cè)。但散裝樣品就必須從多個(gè)點(diǎn)取樣,且每個(gè)點(diǎn)都要單獨(dú)處理,在檢測(cè)前要徹底混勻。肉類、魚類或類似食品既要在表皮取樣,又要在深層取樣,深層取樣時(shí)要小心不要被表面污染。有些食品,如新鮮肉類或熟肉可用滅菌的解剖刀和鉗子取樣;冷凍食品在不解凍的狀態(tài)下用鋸、木鉆或電鉆,一般斜角鉆入來獲得深層樣品;粉末狀樣品取樣時(shí),可用滅菌的取樣器斜角插入箱底,樣品填滿取樣器后提出箱外,再用滅菌勺從取樣器的上、中、下部位采樣。??水樣:取水樣時(shí),最好選用帶有防塵磨口瓶塞的廣口瓶。對(duì)于氯氣處理過的水,取樣后在100mL水樣中加入0.1mL的2%的硫代硫酸鈉溶液。取樣時(shí)應(yīng)特別注意防止樣品的污染,樣品應(yīng)完全地充滿取樣瓶。如果樣品時(shí)從水龍頭上取得,龍頭嘴的里外都應(yīng)擦干凈。打開水龍頭讓水流幾分鐘,關(guān)上水龍頭并用酒精燈灼燒,再次打開水龍頭讓水流1-2min后再接樣并裝滿取樣瓶。這樣的取樣方法能確保供供水系統(tǒng)的細(xì)菌學(xué)分析的質(zhì)量,但如果檢測(cè)的目的是用于追蹤微生物的污染源建議還應(yīng)在水龍頭滅菌前取樣會(huì)在龍頭的里外用棉拭子涂抹取樣,以檢測(cè)水龍頭自身污染的可能性。從水庫、池塘、井水、河流等取水樣時(shí),用無菌的器械或工具拿取瓶子和打開瓶塞,在流動(dòng)水中取樣品是瓶嘴應(yīng)直接對(duì)著水流。大多數(shù)國家的官方取樣程序中已明確規(guī)定了取樣所用器械,如果不具備適當(dāng)?shù)娜觾x器或臨時(shí)取樣工具,只能用手操作,但取樣時(shí),應(yīng)特別小心,防止用手接觸水樣或取樣瓶內(nèi)部。??帶包裝食品:直接食用的小包裝食品盡可能取原包裝,直到檢測(cè)前不要開封防止污染;桶裝或者大容器包裝的液體或固體食品應(yīng)用無菌取樣器由幾個(gè)不同部位采取,一起放入一個(gè)滅菌容器內(nèi),不要過度潮濕,以防食品中固有的細(xì)菌繁殖;對(duì)于桶裝或大容量包裝的冷凍食品,應(yīng)從幾個(gè)不同的部位用滅菌工具抽樣,使之有充分的代表性,將樣品送達(dá)實(shí)驗(yàn)室前,要始終保持樣品處于冷凍狀態(tài)。若樣品一旦融化,不可使其再冷凍,保持冷卻即可。??表面采樣:通過惰性載體可以將表面樣品上的微生物轉(zhuǎn)移到合適的培養(yǎng)基中進(jìn)行微生物檢測(cè),這陣惰性載體既不能引起微生物的死亡,也不應(yīng)使其增殖。這樣的載體包括清水、拭子等。要達(dá)到微生物既不死亡又不增殖很困難,因此取樣后應(yīng)當(dāng)盡快進(jìn)行檢測(cè)。表面取樣技術(shù)只能直接轉(zhuǎn)移菌體,不能做系列稀釋,只有在菌體數(shù)量較少的時(shí)候適用,其最大的優(yōu)點(diǎn)是取樣過程不破壞樣品。常用的表面取樣技術(shù)包括棉拭子、淋洗法、膠帶法等,這里以棉拭子法為例。定性檢測(cè)時(shí),只要涂抹全部需要檢測(cè)的表面即可。而進(jìn)行的定量檢測(cè)時(shí),必須先用滅菌取樣框確定被測(cè)試的區(qū)域。用干燥的棉花纏在4cm長,直徑1-1.5mm的木棒或不銹鋼棒上做成棉拭子(為了方便也可使用一次性棉簽),放進(jìn)合金試管中,蓋上蓋子后滅菌。取樣時(shí)先將拭子在稀釋液中浸濕,然后再待測(cè)樣品表面緩慢旋轉(zhuǎn)拭子平行用力涂抹兩次。涂抹過程中應(yīng)保證拭子在取樣框內(nèi)。取樣后拭子重新裝回有10mL取樣溶液的試管中。??以上就是各種情況下無菌抽樣的操作要求。無菌抽樣的規(guī)范性是保證樣品檢測(cè)準(zhǔn)確性的前提,因此我們?cè)谌訒r(shí)應(yīng)規(guī)范操作,確保從源頭杜絕污染。
硅藻蛋白石和硅藻土礦物成分-結(jié)構(gòu)研究中獲進(jìn)展
硅藻蛋白石和硅藻土礦物成分-結(jié)構(gòu)研究中獲進(jìn)展
近期,礦物學(xué)期刊AmericanMineralogist刊發(fā)了中國科學(xué)院廣州地球化學(xué)研究所礦物表界面作用學(xué)科組袁鵬等關(guān)于硅藻蛋白石礦物微區(qū)成分和結(jié)構(gòu)的研究論文。該文提出,將硅藻蛋白石視作“純”氧化硅礦物的認(rèn)識(shí)應(yīng)予以更新——其硅質(zhì)體相結(jié)構(gòu)總是存在鋁、鐵、鎂、鈣等元素,殼體表面則覆有一層富鋁鐵、厚度為幾十納米的氧化物薄膜。該研究采用聚焦離子束(FIB)處理結(jié)合高分辨透射電子顯微鏡(HRTEM)和譜學(xué)分
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近期,礦物學(xué)期刊AmericanMineralogist刊發(fā)了中國科學(xué)院廣州地球化學(xué)研究所礦物表界面作用學(xué)科組袁鵬等關(guān)于硅藻蛋白石礦物微區(qū)成分和結(jié)構(gòu)的研究論文。該文提出,將硅藻蛋白石視作“純”氧化硅礦物的認(rèn)識(shí)應(yīng)予以更新——其硅質(zhì)體相結(jié)構(gòu)總是存在鋁、鐵、鎂、鈣等元素,殼體表面則覆有一層富鋁鐵、厚度為幾十納米的氧化物薄膜。該研究采用聚焦離子束(FIB)處理結(jié)合高分辨透射電子顯微鏡(HRTEM)和譜學(xué)分
2019年諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)成果
2019年諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)成果
新華社斯德哥爾摩10月7日電氧氣是我們生命活動(dòng)的第一需要。早在幾世紀(jì)前,人類就意識(shí)到了氧氣的重要作用,但是細(xì)胞如何適應(yīng)變化的氧氣水平長久以來仍是“未知數(shù)”。來自美國和英國的三名科學(xué)揭開了細(xì)胞如何與氧氣“互動(dòng)”的神秘面紗,并因此獲得2019年諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)。??評(píng)獎(jiǎng)委員會(huì)說,美國科學(xué)家威廉·凱林、格雷格·塞門扎以及英國科學(xué)家彼得·拉特克利夫的研究成果“揭示了生命中一個(gè)最基本的適應(yīng)性過程的機(jī)制”,為我們理解氧氣水平如何影響細(xì)胞新陳代謝和生理功能奠定了基礎(chǔ)。這一發(fā)現(xiàn)也為人類開發(fā)“有望對(duì)抗貧血、癌癥以及許多其他疾病的新策略鋪平了道路”。??挪威諾貝爾委員會(huì)成員蘭達(dá)爾·約翰遜評(píng)價(jià)說,這真正是一個(gè)“教科書級(jí)別的發(fā)現(xiàn)”。??在漫長進(jìn)化過程中,人類和其他動(dòng)物演化出一套確保向組織和細(xì)胞充足供氧的機(jī)制。例如,人類頸動(dòng)脈體中就含有感知血氧水平的特殊細(xì)胞。1938年的諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)就授予相關(guān)研究,當(dāng)年獲獎(jiǎng)研究揭示了頸動(dòng)脈體在感知不同血氧水平后,是如何與大腦交流從而調(diào)節(jié)呼吸頻率的。??除了頸動(dòng)脈體對(duì)呼吸的調(diào)控機(jī)制,動(dòng)物對(duì)供氧還有更為基本的生理適應(yīng)機(jī)制。比如紅細(xì)胞可為身體各組織運(yùn)送氧氣,缺氧情況下,一個(gè)關(guān)鍵生理反應(yīng)是體內(nèi)名為促紅細(xì)胞生成素(EPO)的激素含量上升,從而刺激骨髓生成更多紅細(xì)胞以運(yùn)送氧氣。自上世紀(jì)90年代起,拉特克利夫和塞門扎就開始探索這一現(xiàn)象背后的機(jī)制。??二人都研究了EPO基因與不同氧氣水平的“互動(dòng)”機(jī)制,最終發(fā)現(xiàn)了在低氧環(huán)境下起到“調(diào)控器”作用的關(guān)鍵蛋白質(zhì)——缺氧誘導(dǎo)因子(HIF)。HIF不僅可以隨著氧氣濃度改變發(fā)生相應(yīng)改變,還能調(diào)控EPO表達(dá)水平,促進(jìn)紅細(xì)胞生成。塞門扎探明了HIF實(shí)際上包含兩種蛋白質(zhì),分別為HIF-1α和ARNT。??科學(xué)家們還發(fā)現(xiàn),當(dāng)氧氣水平上升時(shí),體內(nèi)HIF-1α數(shù)量會(huì)急劇下降。它是如何在富氧環(huán)境下被降解的呢???正是腫瘤專家凱林在研究一種罕見遺傳性疾病——希佩爾-林道(VHL)綜合征時(shí),解開了這一謎團(tuán)。他的研究也因此與上面兩名科學(xué)家的研究聯(lián)系到一起。凱林發(fā)現(xiàn),VHL綜合征患者因VHL蛋白缺失飽受多發(fā)性腫瘤之苦。典型的VHL腫瘤內(nèi)常有異常新生血管,這可能與氧氣調(diào)控通路有關(guān)。在后續(xù)研究中,他又發(fā)現(xiàn),正是VHL蛋白通過氧依賴的蛋白水解作用,負(fù)向調(diào)節(jié)了HIF-1α。??揭示細(xì)胞的氧氣調(diào)控通路,不僅具有基礎(chǔ)科研價(jià)值,還有望帶來疾病新療法。比如,調(diào)控HIF通路將有助于治療貧血;而降解HIF-1α等相關(guān)蛋白有可能抑制血管生成,從而有助對(duì)抗需要新生血管供養(yǎng)的惡性腫瘤。
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新華社斯德哥爾摩10月7日電氧氣是我們生命活動(dòng)的第一需要。早在幾世紀(jì)前,人類就意識(shí)到了氧氣的重要作用,但是細(xì)胞如何適應(yīng)變化的氧氣水平長久以來仍是“未知數(shù)”。來自美國和英國的三名科學(xué)揭開了細(xì)胞如何與氧氣“互動(dòng)”的神秘面紗,并因此獲得2019年諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)。??評(píng)獎(jiǎng)委員會(huì)說,美國科學(xué)家威廉·凱林、格雷格·塞門扎以及英國科學(xué)家彼得·拉特克利夫的研究成果“揭示了生命中一個(gè)最基本的適應(yīng)性過程的機(jī)制”,為我們理解氧氣水平如何影響細(xì)胞新陳代謝和生理功能奠定了基礎(chǔ)。這一發(fā)現(xiàn)也為人類開發(fā)“有望對(duì)抗貧血、癌癥以及許多其他疾病的新策略鋪平了道路”。??挪威諾貝爾委員會(huì)成員蘭達(dá)爾·約翰遜評(píng)價(jià)說,這真正是一個(gè)“教科書級(jí)別的發(fā)現(xiàn)”。??在漫長進(jìn)化過程中,人類和其他動(dòng)物演化出一套確保向組織和細(xì)胞充足供氧的機(jī)制。例如,人類頸動(dòng)脈體中就含有感知血氧水平的特殊細(xì)胞。1938年的諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)就授予相關(guān)研究,當(dāng)年獲獎(jiǎng)研究揭示了頸動(dòng)脈體在感知不同血氧水平后,是如何與大腦交流從而調(diào)節(jié)呼吸頻率的。??除了頸動(dòng)脈體對(duì)呼吸的調(diào)控機(jī)制,動(dòng)物對(duì)供氧還有更為基本的生理適應(yīng)機(jī)制。比如紅細(xì)胞可為身體各組織運(yùn)送氧氣,缺氧情況下,一個(gè)關(guān)鍵生理反應(yīng)是體內(nèi)名為促紅細(xì)胞生成素(EPO)的激素含量上升,從而刺激骨髓生成更多紅細(xì)胞以運(yùn)送氧氣。自上世紀(jì)90年代起,拉特克利夫和塞門扎就開始探索這一現(xiàn)象背后的機(jī)制。??二人都研究了EPO基因與不同氧氣水平的“互動(dòng)”機(jī)制,最終發(fā)現(xiàn)了在低氧環(huán)境下起到“調(diào)控器”作用的關(guān)鍵蛋白質(zhì)——缺氧誘導(dǎo)因子(HIF)。HIF不僅可以隨著氧氣濃度改變發(fā)生相應(yīng)改變,還能調(diào)控EPO表達(dá)水平,促進(jìn)紅細(xì)胞生成。塞門扎探明了HIF實(shí)際上包含兩種蛋白質(zhì),分別為HIF-1α和ARNT。??科學(xué)家們還發(fā)現(xiàn),當(dāng)氧氣水平上升時(shí),體內(nèi)HIF-1α數(shù)量會(huì)急劇下降。它是如何在富氧環(huán)境下被降解的呢???正是腫瘤專家凱林在研究一種罕見遺傳性疾病——希佩爾-林道(VHL)綜合征時(shí),解開了這一謎團(tuán)。他的研究也因此與上面兩名科學(xué)家的研究聯(lián)系到一起。凱林發(fā)現(xiàn),VHL綜合征患者因VHL蛋白缺失飽受多發(fā)性腫瘤之苦。典型的VHL腫瘤內(nèi)常有異常新生血管,這可能與氧氣調(diào)控通路有關(guān)。在后續(xù)研究中,他又發(fā)現(xiàn),正是VHL蛋白通過氧依賴的蛋白水解作用,負(fù)向調(diào)節(jié)了HIF-1α。??揭示細(xì)胞的氧氣調(diào)控通路,不僅具有基礎(chǔ)科研價(jià)值,還有望帶來疾病新療法。比如,調(diào)控HIF通路將有助于治療貧血;而降解HIF-1α等相關(guān)蛋白有可能抑制血管生成,從而有助對(duì)抗需要新生血管供養(yǎng)的惡性腫瘤。
新研究發(fā)現(xiàn)細(xì)菌中的Crispr-Cas9防御系統(tǒng)
新研究發(fā)現(xiàn)細(xì)菌中的Crispr-Cas9防御系統(tǒng)
借助高度先進(jìn)的顯微鏡和同步加速器,哥本哈根大學(xué)的研究人員對(duì)細(xì)菌防御其他細(xì)菌和病毒的分子機(jī)制提出了開創(chuàng)性的見解。相關(guān)結(jié)果發(fā)表在最近一期的《NatureCommunications》雜志上。這一發(fā)現(xiàn)可能會(huì)成為將來與疾病作斗爭(zhēng)的重要基石。??研究人員已經(jīng)證明,被病毒攻擊的細(xì)胞如何激活稱為COA(環(huán)狀寡聚腺苷酸)的分子,而COA則激活稱為CSX1的所謂蛋白質(zhì)復(fù)合物,以消除攻擊者。??“以通俗的說法,CSX
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借助高度先進(jìn)的顯微鏡和同步加速器,哥本哈根大學(xué)的研究人員對(duì)細(xì)菌防御其他細(xì)菌和病毒的分子機(jī)制提出了開創(chuàng)性的見解。相關(guān)結(jié)果發(fā)表在最近一期的《NatureCommunications》雜志上。這一發(fā)現(xiàn)可能會(huì)成為將來與疾病作斗爭(zhēng)的重要基石。??研究人員已經(jīng)證明,被病毒攻擊的細(xì)胞如何激活稱為COA(環(huán)狀寡聚腺苷酸)的分子,而COA則激活稱為CSX1的所謂蛋白質(zhì)復(fù)合物,以消除攻擊者。??“以通俗的說法,CSX
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